بیان، استخراج، تخلیص و بررسی ایمنی‌زایی سه پروتئین نوترکیبLTB, THc, BoNT/A و مقایسه تیتر آنتی‌بادی تولید شده علیه آن‌ها در حیوان آزمایشگاهی

  سابقه و هدف: در میان عوامل باکتریایی، شایع‌ترین عامل بیماری اسهال، باکتری اشریشیا‌کلی انتروتوکسیژنیک است. تزریق زیرواحد LTB توکسین آن قادر به ایجاد مصونیت شش ماهه در میزبان است. توکسین تتانوس کلستریدیوم تتانی عامل بیماری مهلک کزاز است. به‌وسیله واکسن توکسوئید کزاز می‌توان از بیماری کزاز جلوگیری نمود. این مصونیت تا 10 سال در انسان ادامه می‌یابد. ناحیه اتصالی توکسین کزاز (THc) بخش اصلی در ایمنی‌زایی این توکسین محسوب می‌شود. کلستریدیوم بوتولینوم عامل بیماری بوتولیسم است. تزریق واکسن توکسوئید بوتولینوم نیز مصونیت 2 ساله علیه بیماری ایجاد می‌کند. هدف از این مطالعه، تولید و بررسی ایمنی‌زاییLTB, BONT/A و THc در حیوان می‌باشد. مواد و روش‌ها: از سه باکتری E.Coli Bl21 DE3 تراریخت شده با وکتور pET28a که به‌طور جداگانه حاوی سه ژن نوترکیب ltb, bont/a-Hc و thc بودند، جهت بیان پروتئین‌های نوترکیب فوق استفاده شد. هر سه پروتئین مورد نظر استخراج، تخلیص و بر روی ژل SDS-PAGE بررسی گردیدند. سپس ایمنی‌ز‌‌ایی موش‌های آزمایشگاهی به‌وسیله این سه پروتئین صورت گرفت. تیتر آنتی‌بادی حاصل از پروتئین‌های نوترکیب با استفاده از تست الایزا و آزمون آماری دو طرفه آنووا مورد ارزیابی و مقایسه قرار گرفت. یافته‌ها: نتایج ارزیابی ژل SDS-PAGE بیان و تخلیص مناسب هر سه پروتئین را نشان داد. نتایج ایمنی‌زایی و تست‌های الایزای سرم این سه گروه ایمن شده نشان داد که تیتر آنتی‌بادی علیه پروتئین نوترکیب THc بالاتر از پروتئین‌های نوترکیب LTB و BONT/A است. هم‌چنین تفاوت معنی‌داری بین تیتر آنتی‌بادی LTB و BONT/A (0001/0P value<) مشاهده گردید.  نتیجه‌گیری: اختلاف در تیتر آنتی‌بادی این سه گروه ممکن است به طول عمر سلول‌های خاطره حاصله در این گروه‌ها ارتباط داشته باشد. هر چند که نتایج نیاز به مطالعات بیش‌تری دارد